1.1 材料与试剂
苯甲基硫苷标准品(glucotropaeolin, TRO) (>95%),日本TCI公司;
硫酸酯酶(≥10,000 units/g solid), 美国Sigma公司;
DEAE SephadexA-25,美国Amersham Biosciences公司;
I3C (≥98%)、I3A (≥98%)、四甲基氯化铵,中国Adamas-beta公司。
参照EWA等[13]的方法,用I3C和抗坏血酸合成ABG。其他试剂均为分析纯。
1.2 色谱分析
HPLC分析条件:色谱柱为Thermo BDS C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm),
流动相A:四甲基氯化铵(0.5 g/L),
流动相B:乙腈(体积分数为20%);
线性梯度洗脱程序为1 min时,100% A;21 min时,100% B;26 min时,100% A,保持5 min后结束;31min内可使硫苷全部分离;检测波长229 nm;流速1.1 mL/min;柱温35 ℃;进样量10 μL;以TRO作为内标。
按照公式1,根据保留时间、峰面积、内标和相对校正系数对硫苷组分进行定量测定。